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葛根的化學(xué)成分研究論文
葛根為豆科植物野葛Puemilbata(WilH)Ohw的干燥根，習(xí)稱野葛。具有解肌退熱，生津，透疹，升陽止瀉之功效。用于外感發(fā)熱頭痛、項(xiàng)背強(qiáng)痛、口渴、消渴、麻疹不透、熱痢、泄瀉，高血壓頸項(xiàng)強(qiáng)痛等疾病。異黃酮類化合物是葛根的主要成分；其中葛根素是葛根的特有成分，在治療心血管系統(tǒng)疾病上有著廣泛的應(yīng)用前文報(bào)道了從葛根乙醇提取物的水部位分離得到11個(gè)異黃酮碳苷類化合物。在對(duì)葛根化學(xué)成分的進(jìn)一步研究中，從葛根乙醇提取物的石油醚，醋酸乙酯和正丁醇部位分離并鑒定了22個(gè)化合物；其中化合物15-8151821和22為本種植物中首次分離得到，化合物1，5-7151821和22為從本屬植物中首次分離得到。
1材料
BUerAvance300和BiukerAance500型核磁共振儀；Agiet100SeiesLC/MJDTaP質(zhì)譜儀；柱色譜用硅膠（200-300目，青島海洋化工集團(tuán)）薄層色譜硅膠預(yù)制板（煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所）Waer:分析型高效液相色譜儀；Agilent1100series制備型高效液相色譜儀；制備型色譜柱：AgilentpeP-C8(50mmx250mm10PhenonenexSYnergi4p〇la-RP(0mmx250mm4Mm)AltchAltmaqs(2mmX250mm10ym)分析型色譜柱：PhenomenexSynegi4pP〇^nRP(4_6mmx250mm4Mm)AltchAlmaC8(4.6mmx250mm5Mm)。柱色譜和萃取所用石油醚、醋酸乙酯、氯仿、正丁醇和甲醇均為分析純（Un-Chm)HPLC級(jí)甲醇購自Men%純水經(jīng)Mill-Q純化系統(tǒng)純化；混合溶劑比例為體積比。葛根原藥材購于安徽省金寨縣，經(jīng)廣東省中藥研究所張現(xiàn)濤鑒定為野葛POba〇的干燥根，標(biāo)本保存于澳門大學(xué)中華醫(yī)藥研究院。
2提取和分離
干燥葛根藥材20kg加200L95%乙醇熱回流提取3次，得流浸膏3.3kg取流浸膏2.9kg用3倍量去離子水稀釋，攪拌使之混勻后，依次用石油醚，醋酸乙酯，正丁醇萃取;將萃取層旋干后得石油醚部位提取物98.4g醋酸乙酯部位提取物160g正丁醇部位提取物1108g卩水部位提取物935g將葛根石油醚部位（98.4g反復(fù)硅膠柱色譜，以石油醚醋酸乙酯梯度（100:0-0:100)先脫，得到1(30mg2(200mg3(200mg4(300mg,5(5mg5個(gè)化合物以及化合物6和7的混合物，化合物6和7的混合物通過制備高效液相[色譜柱PhenomenexSynergi4mP〇la-RP30250mm4Mm)流速10mL。miff1;甲醇水（MOH-HO85:15)]分離得到化合物6(5mg和7(5mg將葛根醋酸乙酯部位（160g經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿甲醇（00D~1:1)洗脫，得到21個(gè)組分（EF1~EI21)。EF經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿甲醇梯度(100D~1:1)洗脫得化合物8(10mg和12(80mg。EF11經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿甲醇梯度洗脫得化9(20mg)11(6.4g13(260mg和14(150mg。EF12經(jīng)ODS柱色譜，MOH-HO梯度（20:80~0:100)洗脫，并進(jìn)一步通過制備高效液相[色譜柱PhmcmenexSynergi4,uP〇la-RP柱（30mmx250mm4Mm)流動(dòng)相MOH-HO(0:50);流速10mL。mn1]純化得到化合物15(8mg。EF15經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿甲醇梯度洗脫得化合物16(70mg。EF17經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿甲醇梯度洗脫得化合物17(4.2g。E20經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿甲醇梯度洗脫得化合物1030mg。
葛根正丁醇部位提取物（2049g經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿甲醇（95:5~1:1)洗脫，得到13個(gè)組分(BF1~BF13。BF2經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶得到化合物11(15mg。BF~合并后經(jīng)制備高效液相[Agilent
PeP-C色譜柱（50mmX250mm10pm)流動(dòng)相
Me:H-H〇(60:40)流速50mL。miff1]，分離得化
合物11(5mg)14(25mg18(2mg和組分BF.lBF.1經(jīng)制備高效液相[PhnonnexSnegi4ppolarRP色譜柱（0mmX250mm4Mm)流動(dòng)相M(H-HO(60:40)流速10mL。mn1]分離得到化合物19(2mgBF經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶得到化合物20(40mg。BF和BF合并后經(jīng)制備高效液相[Ag-
lntPeP-C色譜柱（50mmX250mm10Pm)流動(dòng)
相MOH-HO(50:50)流速50mL。mn1]分離得化合物14(25mg4'甲氧基葛根素（6mg以及組分BF.1和BF.2BF.2經(jīng)制備高效液相[PhencmenexSynegi4PP〇latRP色譜柱（30_X250mm4Pm)流動(dòng)相MOH-HO(50:50)流速10mL。mn1]分離得到葛根素（2mg和化合物21(2mg。BF3經(jīng)制備高效液相[AgilntPeP-；色譜柱(50mmx250mm10Pm)流動(dòng)相MOH-HO(25:75)流速50mL。mn1]分離得3'羥基葛根素（0mg葛根素4-3葡萄糖苷（8mg)和化合物22(2mg3結(jié)構(gòu)鑒定
化合物1白色無定形粉末（甲醇）1H-NMR
(CDCi300MHZS5.37(1HdJ=5.3H，zH-7)
463(1HmH-3)1.25(多個(gè)HmCH)1.02(HSH-19)0.80~0.94(15Hm5XCH)0.68(HSH-18>;3CNMR(CDCi75MHZS37.0(C1)27.8(C2)73.7(C3)38.2(C4)139.7(C5)122.6(C6)，31.9(C7)31.9(C8)50.0(C9)36.6(C-10)21.0(C11)，39.7(C-12)42.3(C13)56.7(C-14)24.3(C-15)28.2(C-16)56.0(017)11.8(018)19.3(C49)，36.1(C-20)18.8(C21)，33.9(C22)26.1(C23)45.8(C24)29.1(C25)19.8(C-26)19.0(C27)23.1(C-28)12.0(C-29)173.3(C-1'34.7(C-2’)，25.1(C3’）29.1~29.7(C4’~C13’）31.9(C14'22.7(C15')14.1(C16')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道一致，故確定化合物1為卩谷甾醇棕櫚酸酯。
化合物3白色無定形粉末（甲醇）ES-MSm/Z405[M+H|+;1H-NMR(DMS:X4300MHZ
57.67(1HdJ=8.4H，zH-7)，7.60(1HSH-10)7.11(HdJ=2.0HzH-10)6.92(1H卻J=8..20HzH-8)6.91(HSH4)5.34(HmH-13)5.11(HmH-17)3.34(2HdJ=6.8HzH-12)206(4HmH-1516)1.68(3HSH-19)1.65(3H，SH-20)1.57(3H，SH-21)
13CNMRCDMSXd75MHZS126.4(C1)，1146(C1a)123.9(C2)159.4(C3)，101.9(C4)152.8(C4a。157.6(102.3(C-3a。120.8(C-7)113.9(C7a。103.7(〇8)155.9(C9)98.5(C-10)156.9(C-10a)158.9(C-11a。27.2(C-12)120.5(C-13)136.1(C-14)39.1(C-15)26.0(C16)，121.5(017)130.8(C18)17.5(C19)
25.4(C20)15.8(C21)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致，故確定化合物3為葛香豆雌酚（Peiaro)化合物4白色無定形粉末（醋酸乙酯石油醚）1H-NMR(CDCl300MHZS469(1HdJ=24HZH.,-29)4.56(HmH,-29)3.19(1H卻J=5.210.8H，zH-3a)1.68(3H，SH-30)1.03(HSH-26)0.97(3HSH-23)0.94(3HSH-27)0.83(3H，SH-25)0.79(3H，SH-28)0.76(3HSH-24)13CNMR(CDCl75MHZS38.7(C1)27.4(C2)79.0(C3)38.8(C-4)55.3(C5)18.3(C6)34.3(C-7)40.8(C8)50.4(〇9)372(C-10)20.9(C-11)25.1(C-12)38.0(C43)428(Cl4)27.4(C-l5)35.6(C-16)43.0(Cl7)483(Cl8)，48.0(Cl9)151.0(C20)298(C21)40.0(C22)280(〇23)15.4(C24)161(C-25)160(C-26)14.5(C-27)18.0(〇28)109.3(〇29)19.3(030)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致，故確定化合物4為羽扇豆醇（lupeo)。
化合物5白色無定形粉末（醋酸乙酯石油醚）'H-NMR(CDC1300MHZS469(HdJ=2.3H，zH.,-29)457(dJ=2.3HzH,-29)1.72(3HSH-20)1.05(6HSH-2326)，1.02(3H，SH-24)0.95(H，SH-27)0.93(3H，SH-25)，
0.80(3HSH-28)13CNMR(CDq75MHZS39.6(Cl)34.1(〇2)218.1(C3)47.3(C-4),549(C5)19.7(Cs)33.6(C7)40.8(C8)，49.8(C9)369(C-10)21.5(Cll)25.1(Cl2)38.1(C-13)42.9(C-14)27.4(C-15)35.5(C-16)43.0(C17)48.2(Cl8)47.9(C19)150.9(-20)29.8(-21)40.0(-22)26.6(-23)，21.0(C24)16.0(C25)15.8(C26)14.5(C-27)18.0(-28)109.4(-29)19.30(-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致，故確定化合物5為羽扇豆酮（UPeone)。
化合物6淡黃色油狀物；1H-NMR(EMSad，500MHZS7.73(2HddJ=5.73.3H，zH-25)，
7.66(2HddJ=5.73.3HZH-34)，4.01(4HdJ=6.4HZH-1;1")，250(2HmH-2，’2")0.92
(12HdJ=6.7HZH-3，’4，’3;’4")13CNMR(EMSCXd125MHZS167.3(-CCD-)132.2(C^l6)，129.0(-25)131.9(C-34)71.6(Cl;l"27.7(C2,2")19.3(C3;4,3"4")。以上數(shù)
據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致，鑒定為鄰苯二甲酸二異丁酯（diisobuylPhhalae)。
化合物7淡黃色油狀物；1H-NVIR(EMSC-d500MHZS7.71(2HmH-25)7.67(2HmH-3
4)，415417(eah2HddJ=11.05.4HZH-1，
l"1.63(2HmH-2,2"1.20~1.40(16HmH-3,4,5,7,3"4"5"7")0.88(6HtJ=6.8HZH-8,8"0.86(6HtJ=6.8Hz6"
13CNMR(EMS:)d125MHZS166.9(-COD),131.7(C-16)128.6(C25)，131.5(C34)，
67.3(Cl，l"38.0(C2,2")29.7(C3,3")
23.2(C4,4"223(C5,5")10.7(C-5;6")
28.3(C7,7"13.8(C8,8"以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致，鑒定為鄰苯二甲酸二（2乙基）己酯[biS2-tylhexy)Phhalae。
化合物8淡黃色無定形粉末；1H-NVIR(CMS-d500MHZS10.7(lHS3-)H)7.86(HdJ=8.6HzH-l)7.61(lHSH-7)7.25
(H，SH-10)6.95(HddJ=8.622HZH-2)
6.91(lHdJ=2.2HzH-4)6.63(1HdJ=9.8HzH4’)，5.84(lHdJ=9.8HZH-3，1.43(6H
4H-5;6，13CNMR(EMSOd，125MHZS122.7(Cl)1040(Cla)113.8(C2)，161.4(C-3)103.0(C-4)161.3(C-4a),157.4(C-6)101.8(C-
5a)117.2(0-7)116.3(〇7，),119.5(C-8)152.0(C9)100.0(C-10)155.0(Cl0a)159.9(-11a)76.7(C2’）131.0(C3’）121.8(C4’）27.5
(CC5;6’以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致|101,故確定化合物8為槐香豆素A(scphoacomestanA)。
化合物151H-NVIR(EMS3-(d500MHZS10.67(lHbrs7-:)H)8.97(2Hbrs3’-:)H4’-〇H〉8.26(lH,sH-2)7.97(lHdJ=8.6HzH-
5)7.03(HdJ=2.1HZH-2’6.93(lHdJ=8.8HzH6)6.85(HbSHg),6.82(lHddJ=
8.321HzH6’6.78(lHdJ=8.3HZH-
5’13C-NMR(EMS>d125MHZS152.7(C2)
123.6(C-3)174.7(C4)，116.6(C4a)l27.3(C-
5)115.1(C-6)162.5(C-7)，102.1(C8)157.4(C8a)123.0(Cl’116.7(C2’1448(C3’）145.2(C4’115.3(C-5’119.9(CV)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故確定化合物15為3'羥基大豆苷元（3’-hyd〇ydadzen)。
化合物21白色無定形粉末（甲醇）1H-NMR(EMS:Xd300MHZ)S5.77(lHSH4)5.77
(2HmH-78)432(H?J=6.0HzH-9)
417(lHdJ=7.8HzH-1’243(lHdJ=16.8HZH,-2)2.08(lHdJ=16.8HZH,-2)1.81(HdJ=1.2HZH-13)1.18(3HdJ=6.3HzH-10)0.93(3HSH-12)0.93(3HSH-11)
13CNMR(EMSad75MHZS40.9(Cl),49.3(匕2)197.3(C3)125.6(C4)163.9(C5)76.8(C-
130.3(C-7)133.3(C8)74.5(C9)20.9(C-10)24.1(C-11)23.0(C12)18.8(C43)100.9
(Cl73.7(C2)76.9(C-370.0(〇4’)，77.8
(C5)61.1(〇6')。以上資料與文獻(xiàn)報(bào)道一致|12,故確定化合物21為（6$9R)長壽花糖苷。
其余化合物與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)比較分別被鑒定為：P-谷甾醇（2)1131，香豆雌酚（9)114,尿囊素（10)|15]，大豆苷元（1)芒柄花素（12)1141，3'甲氧基大豆苷元（3)芒柄花苷（14)1161，染料木苷（16)，大豆苷
(17)甲氧基芒柄花苷，羥基芒柄花苷（19)[18，(^)-PueiolB2-(3-glu〇〇Pyianoside
(20)蔗糖（22)|2<1。
4討論
本研究中分離得到22個(gè)化合物，其主要成分為異黃酮類成分，與此前葛根成分研究結(jié)果一致。作者同時(shí)從本研究中分離得到了兩個(gè)微量的鄰苯二甲酸酯類化合物，此類成分在多種中藥成分研究中被分離得到，而鄰苯二甲酸酯類化合物是一類環(huán)境內(nèi)分泌干擾素，具有致畸、致癌、致突變性和遺傳毒，因此在未來中藥質(zhì)量控制研究中對(duì)這一類成分的控制研究值得關(guān)注。
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