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簡述6種抗菌藥對(duì)雞大腸桿菌病的療效比較
摘 要：本次試驗(yàn)對(duì)從甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)提供的雞大腸桿菌菌種進(jìn)行了體外抑菌試驗(yàn)，觀察了硫酸多黏菌素、鹽酸土霉素、硫酸新霉素、乳酸諾氟沙星、硫酸慶大霉素、頭孢拉啶對(duì)大腸桿菌的抑制效果。體外抑菌試驗(yàn)采用的是藥敏試驗(yàn)的紙片擴(kuò)散法，藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示硫酸多黏菌素和鹽酸土霉素屬于極度敏感，硫酸新霉素和乳酸諾氟沙星屬于高度敏感，硫酸慶大霉素和頭孢拉啶屬于中度敏感。選取某養(yǎng)殖戶健康雞350羽，分為7組(其中一組為對(duì)照組)，分別用這6種藥物進(jìn)行治療，6種藥物中硫酸多黏菌素的療效最好，治愈率達(dá)98 %，其他四種藥物也有較好的療效。通過本次試驗(yàn)為靖遠(yuǎn)地區(qū)雞大腸桿菌病的防治用藥提供參考。
關(guān)鍵詞：大腸桿菌;藥敏試驗(yàn);抗菌藥物;療效
隨著我國養(yǎng)禽業(yè)集約化的快速發(fā)展，禽類疾病也越來越頻發(fā)。細(xì)菌性疾病呈現(xiàn)上升趨勢(shì)[1-2]，大腸桿菌病已成為困擾養(yǎng)禽業(yè)主要的疾病之一。禽大腸桿菌病是由大腸桿菌的某些致病性菌株所引起的多種禽病的總稱，其特征是引起雞的心包炎、腹膜炎、關(guān)節(jié)炎、輸卵管炎、大腸桿菌性腸炎、肉芽腫、敗血癥等癥狀[3]。例如雞胚感染大腸桿菌后可導(dǎo)致雞胚的死亡率升高、孵化率下降以及增加雛雞發(fā)病死亡率。成年雞感染大腸桿菌可增加死亡率，導(dǎo)致生長緩慢、飼料酬勞率降低。由于禽大腸桿菌抗原性比較復(fù)雜、臨床病變表現(xiàn)復(fù)雜，所以當(dāng)禽大腸桿菌病常與病毒性疾病和其他細(xì)菌性疾病并發(fā)或繼發(fā)時(shí)，容易給養(yǎng)禽業(yè)帶來十分大的危害。目前禽大腸桿菌病臨床上一般已藥物治療為主[4-5]。但是，由于養(yǎng)殖過程中用藥不科學(xué)、盲目的濫用抗菌類藥物，使得細(xì)菌的耐藥性理由逐漸的顯現(xiàn)出來，由此造成的危害十分嚴(yán)重，不僅降低了抗菌藥的療效、延長治療周期，而且增加了死亡率，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
1 試驗(yàn)材料
1.1 主要儀器與設(shè)備
托盤天平、電熱恒溫干燥箱、隔水式恒溫培養(yǎng)箱、打孔器、無菌操作臺(tái)、微量移液槍、試管、燒杯、錐形燒瓶、平皿、接種環(huán)、定性濾紙、打孔器。
1.2 試劑
瓊脂、牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、0.1 mol/L氫氧化鈉溶液、純化水、滅菌生理鹽水。
1.3 藥品
硫酸多黏菌素可溶性粉，批號(hào)20140301，規(guī)格：100 g/袋。由上海宏牧動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。鹽酸土霉素可溶性粉，批號(hào)140702，規(guī)格：100 g/袋;由華北制藥集團(tuán)動(dòng)物保健有限公司生產(chǎn)。硫酸新霉素可溶性粉，批號(hào)：140201，規(guī)格：100 g/袋;由華北制藥集團(tuán)動(dòng)物保健有限公司生產(chǎn)。乳酸諾氟沙星可溶性粉，批號(hào)20140816，規(guī)格：100 g/袋;由北京華盛堂生物科技有限公司生產(chǎn)。硫酸慶大霉素可溶性粉，批號(hào)140102，規(guī)格：100 g/袋;由華北制藥集團(tuán)動(dòng)物保健有限公司生產(chǎn)。頭孢拉啶可溶性粉，批號(hào)20140906，規(guī)格：100 g/袋;由北京華盛堂生物科技有限公司生產(chǎn)。
1.4 試驗(yàn)動(dòng)物
由靖遠(yuǎn)某雞場(chǎng)提供33日齡健康三黃雞350羽(均未使用過任何藥物)，雌雄各半，體重相近，試驗(yàn)前觀察一周，正常采食和飲水。
1.5 試驗(yàn)菌種
由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供。
2 試驗(yàn)策略
2.1 培養(yǎng)基的制備
根據(jù)《獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》[6]，制備營養(yǎng)肉湯、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
2.1.1 菌種活化
將實(shí)驗(yàn)室提供的大腸桿菌接種于3 mL～5 mL經(jīng)滅菌的試管肉湯中，置于37 ℃恒溫箱，培養(yǎng)16 h～18 h。用滅菌接種環(huán)取出少量接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，劃線均勻，以獲得單個(gè)菌落。
2.1.2 挑取單一菌落培養(yǎng)
用滅菌接種環(huán)在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基中挑取單一菌落接種于3 mL～5 mL經(jīng)滅菌的試管肉湯中，置于37 ℃恒溫箱，培養(yǎng)16 h～18 h。
2.2 藥敏片的制備
2.2.1 藥液的配制
因藥物的濃度和劑量直接影響抑菌試驗(yàn)的結(jié)果，所以藥品需精確配制。商品藥應(yīng)嚴(yán)格按照其推薦治療量配制。
2.2.2 藥敏片的制備
參照《抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)策略》中藥敏紙片的制作策略[7]，將定性濾紙，用打孔機(jī)打成6 mm直徑的圓形小紙片，每100片一組，并將其放入6個(gè)清潔干燥的無菌瓶中，用牛皮紙包扎瓶口。經(jīng)121 ℃高壓滅菌15 min后，放在37 ℃恒溫箱中過夜，使完全干燥。按每張紙片飽和吸水量為0.01 mL計(jì)算，向小瓶內(nèi)分別加入不同6種藥液1 mL，不停翻動(dòng)紙片，使紙片在藥液中充分浸泡1 h，置于4 ℃冰箱內(nèi)1 h～2 h。在分別放置在平皿中，烘箱烘干，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
2.3 藥敏試驗(yàn)
在超凈臺(tái)中，將稀釋的菌液，置于瓊脂平板表面，用已滅菌玻璃棒涂布均勻。在超凈臺(tái)中干燥5 min后，用無菌鑷子將上述6種藥敏試紙貼于瓊脂平板表面，每種紙片貼3張，并輕壓使其緊貼在平板表面，藥敏試紙一旦接觸平板就不要再輕易移動(dòng)。各紙片中心距離應(yīng)大于26 mm，需準(zhǔn)確記錄每種藥敏片的名稱，置于37 ℃溫箱培養(yǎng)16 h～18 h，取出觀察結(jié)果。
2.4 臨床試驗(yàn)分組及用藥
將養(yǎng)雞場(chǎng)提供的350羽雞隨機(jī)分為7個(gè)組試驗(yàn)，每組50羽，雌雄各半，體重相近。用藥組每羽試驗(yàn)雞均口服大腸桿菌菌液0.6 mL，進(jìn)行人工誘導(dǎo)感染。試驗(yàn)分組及用藥情況見表1。
3 結(jié)果與分析
3.1 藥敏試驗(yàn)
如表2所示，根據(jù)抑菌圈直徑的大小，6種藥物對(duì)大腸桿菌的敏感性依次為硫酸多黏菌素、鹽酸土霉素、硫酸新霉素、乳酸諾氟沙星、硫酸慶大霉素、頭孢拉啶。根據(jù)美國NCCLS判定標(biāo)準(zhǔn)，硫酸多黏菌素和鹽酸土霉素屬于極度敏感，硫酸新霉素和乳酸諾氟沙星屬于高度敏感，硫酸慶大霉素和頭孢拉啶屬于中度敏感。
3.2 臨床治療試驗(yàn)
6種抗菌藥對(duì)雞大腸桿菌病的治療效果見表3。由表3可知，對(duì)350羽病雞分別采用硫酸多黏菌素、鹽酸土霉素、硫酸新霉素、乳酸諾氟沙星、硫酸慶大霉素、頭孢拉啶進(jìn)行治療，硫酸多黏菌素平均治愈率最高為98 %，其后依次為硫酸新霉素、乳酸諾氟沙星、硫酸慶大霉素和頭孢拉啶。
4 討論
4.1 自制藥敏片的好處
本次試驗(yàn)采用的是靖遠(yuǎn)地區(qū)臨床常用藥物制成的藥敏片。通過試驗(yàn)證明，應(yīng)用自制的藥敏紙片進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，能做到靈活選藥，與某病菌相關(guān)的藥物均可隨時(shí)制作成藥敏紙片，可在當(dāng)?shù)胤秶鷥?nèi)從常用的藥品中篩選出最敏感的藥物，并且可在短時(shí)間內(nèi)確定最優(yōu)藥物和最佳劑量，既能及時(shí)治療降低死亡率，又能避開盲目用藥，減少浪費(fèi)。
4.2 應(yīng)用抗菌藥必須有明確的臨床指征
在選用抗菌藥物對(duì)雞大腸桿菌病進(jìn)行治療時(shí)，必須要有明確的臨床指征作為依據(jù)。現(xiàn)階段我國的雞大腸桿菌病多以混合感染為主，但不同病原為主的混合感染表現(xiàn)的臨床癥狀也不盡相同，在臨床應(yīng)用中應(yīng)根據(jù)臨床癥狀、病例剖檢[8]，再結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果進(jìn)行綜合判定，找出病原，根據(jù)病原選擇最佳的藥物進(jìn)行治療，切不能在不明病因的情形下盲目用藥。
4.3 盡量做到根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選藥
雞大腸桿菌主要通過呼吸道感染，并且容易產(chǎn)生耐藥性。因此，在選用抗生素類藥物治療大腸桿菌病時(shí)必須具有針對(duì)性。如果條件允許，最好要對(duì)分離的病菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果針對(duì)性地選擇藥物，這樣會(huì)起到藥半功倍的效果[9-11]。
5 結(jié)論
本次試驗(yàn)將靖遠(yuǎn)地區(qū)的大腸桿菌，人工誘導(dǎo)健康雞感染發(fā)病，通過臨床療效和實(shí)驗(yàn)室藥敏試驗(yàn)，確定此次所選藥品中的硫酸多黏菌素對(duì)治療雞大腸桿菌病的治療效果顯著，適用于靖遠(yuǎn)地區(qū)雞大腸桿菌病的治療。
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