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HPLC法測定不同采收期小葉榕葉中異牡荊苷的含量論文
Abstract:Objective To develop a quantitative method to determine isovitexin in Folium Fici Microcarpae, and to compare the content of isovitexin in Folium Fici Microcarpae of different growth stages.Methods HPLC method was used by using MeOH?H2O (38∶62) as mobile phase. The detection wavelength was at 270 nm.Result The highest content of isovitexin from different growth stages was 0.69%, and the lowest was 0.18%. The contents in 7-12 moths were significantly higher than other months. Conclusion This method was simple, quick and accurate for determination of isovitexin in Folium Fici Microcarpae.Key words:HPLC; Folium Fici Microcarpae; isovitexin
小葉榕葉Folium Fici Microcarpae，又名小榕葉、落地金錢，來源于�？崎艑僦参镩艠洌‵icus microcarpa L.f.）的葉。小葉榕葉為民間常用中草藥，其味淡，性涼，具有清熱發(fā)表、解毒消腫、祛濕止痛的功效［1］。用于治療哮喘和慢性支氣管炎，在治療心血管疾病、抗炎、抑菌等方面也都有顯著的效果［2］。其中主要含黃酮、三萜類和甾體化合物等化學(xué)成分［3］。小葉榕葉中的黃酮類成分主要為異牡荊苷（另文報道）。本實驗采用HPLC法，建立了小葉榕葉中異牡荊苷的含量測定方法。該方法操作簡便、快速、重現(xiàn)性好，適用于本品的質(zhì)量控制。
1 儀器與試藥
美國Waters高效液相色譜儀：Waters 600型泵，2487型紫外檢測器，Empower工作站。賽多利斯電子天平。
小葉榕藥材采自廣州，在一年中各月份分別采集，所有樣品由廣東藥學(xué)院房志堅副教授鑒定為�？崎艑僦参镄∪~榕Ficus microcarpa L.f.的葉。對照品異牡荊苷為自制，經(jīng)UV、氫譜、碳譜鑒定（另文報道），并利用HPLC歸一化法分析其純度達(dá)99.48%。甲醇（色譜純，天津科密歐公司），其他試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2．1 色譜條件
Gracesmart C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇?水（體積比38∶62）；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL/min；檢測波長：270 nm；進(jìn)樣量：20 μL。
2．2 對照品溶液的制備
取異牡荊苷對照品適量，精密稱定，以體積分?jǐn)?shù)50％甲醇溶解，配制成每1 mL含異牡荊苷21.6 μg的溶液，以此作為對照品溶液。
2．3 供試品溶液的制備
取本品粉末（過20目篩）約1 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入體積分?jǐn)?shù)50％甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流40 min，放冷，再稱定重量，以體積分?jǐn)?shù)50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液10 mL，通過聚酰胺柱（60～80目聚酰胺約2 g，裝于內(nèi)徑1.5 cm的小柱），以體積分?jǐn)?shù)50％甲醇洗脫，洗脫液收集于100 mL量瓶，并以洗脫液定容至刻度，搖勻，即得。
2．4 線性關(guān)系考察
分別精密量取“2．2”項下對照品溶液0.25，0.5，1.0，2.0，3.5，5.0和10.0 mL置10 mL量瓶，加體積分?jǐn)?shù)50%甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積，分別為11 565、21 718、44 185、88 508、153 526、221 861、458 014，依峰面積（A）與質(zhì)量濃度（ρ）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得回歸方程為A=21 171ρ-2 585.1，r=0.9996，表明異牡荊苷質(zhì)量濃度在0.54～21.6 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2．5 精密度試驗
精密吸取對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，求得RSD值為0.73％，表明精密度良好，結(jié)果見表1。
2．6 穩(wěn)定性試驗
對同一供試品溶液，分別于0，2，4，12，24 h進(jìn)樣，測定異牡荊苷峰面積，求得RSD值為1.84％，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見表1。
2．7 重復(fù)性試驗
取同一批號樣品5份，按供試品溶液制備方法平行處理，依法測定，求得RSD值為0.42％，表明重復(fù)性良好，結(jié)果見表1。表1 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗測定結(jié)果（略）
2．8 回收率試驗
精密稱取已知含量的樣品數(shù)份，精密加入一定量的對照品溶液，依法測定，計算平均回收率為100.51％，RSD值為4.50％，結(jié)果見表2。表2 回收率試驗測定結(jié)果（略）
2．9 樣品含量測定
分別取不同采收期的樣品按供試品溶液制備方法處理，依法測定，計算含量。結(jié)果見圖1及表3。表3 不同月份小葉榕葉中異牡荊苷的含量（略）
3 討 論
3．1 異牡荊苷為小葉榕葉中含量較高的黃酮類藥效組分之一，故將其作為小葉榕葉質(zhì)量評價的指標(biāo)成分。異牡荊苷在270 nm處有最大吸收［4］，故選擇該波長為測定的波長。實驗曾比較不同比例的甲醇作為提取液，以體積分?jǐn)?shù)50％甲醇的提取液峰面積較高，雜質(zhì)較少，確定選用體積分?jǐn)?shù)50％甲醇回流提取。提取液通過聚酰胺柱能有效去除雜質(zhì)，減少對色譜柱的損害。
3．2 本試驗考察了不同采收月份藥材的情況，結(jié)果表明，小葉榕葉中異牡荊苷成分的含量在1～6月份較低，在7～12月份較高。該結(jié)果為小葉榕葉的合理采收和利用提供了理論依據(jù)。對于不同采收年限，不同產(chǎn)地的藥材還有待于進(jìn)一步考察。
3．3 本研究建立了小葉榕葉中異牡荊苷含量的測定方法。線性關(guān)系及重現(xiàn)性良好，方法穩(wěn)定準(zhǔn)確，可作為小葉榕葉的質(zhì)量控制方法，為進(jìn)一步研究其物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)理打下了基礎(chǔ)。
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