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地中海貧血輸血前檢驗(yàn)論文
地中海貧血輸血前檢驗(yàn)論文【1】
【摘 要】目的：目的是使地中海貧血患者輸入的血液成份有效存活，而且不會(huì)引起地中海貧血患者的紅細(xì)胞發(fā)生破壞。
確保血液質(zhì)量，確保治療效果等安全用血需要，確保地中海貧血病人的安全并有益于病人。
方法：全血或血液成份發(fā)給臨床輸注之前必須對(duì)地中海貧血患者和獻(xiàn)血者及血液做多項(xiàng)血型血清學(xué)試驗(yàn)，包括：認(rèn)真做好正反定型和Rh(D)定型，做好抗體篩選和鑒定，交叉配血試驗(yàn)用生理鹽水和凝聚胺法。
結(jié)果：認(rèn)真扎實(shí)做好輸血前檢驗(yàn)，未出現(xiàn)因輸血發(fā)生的醫(yī)療事故。
結(jié)論：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中，輸血前檢驗(yàn)實(shí)施過程，每一環(huán)節(jié)均有可能發(fā)生差錯(cuò)，稍有疏忽將導(dǎo)致不良后果。
通過細(xì)心查對(duì)及重視配血液標(biāo)本，認(rèn)真做好正反定型和Rh(D)定型，做好抗體篩選和鑒定，高度重視交叉配血這些試驗(yàn)，可防止和避免許多輸血反應(yīng)，達(dá)到保證安全輸血的目的。
【關(guān)鍵詞】地中海貧血 安全輸血 血液 檢驗(yàn)
1 材料和方法
1.1 臨床病例。
收集從1994~2006年在我院地中海貧血綜合征患者輸血的所有病人，年齡1～49歲，男99人，女89人。
1.2 試劑和方法。
用長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的抗A、抗B血型定型試劑(單克隆抗體)，東莞市中心血站提供的A、B、O血型紅細(xì)胞反定型試劑，英國DIAGNOSTICS SCOTLAND公司制造的Rh血型檢測試劑，(臺(tái)資)珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的凝聚胺介質(zhì)試劑。
1.3 地中海貧血綜合征輸血指征。
地中海貧血是由于Hb中珠蛋白肽鏈合成受到部分或全部抑制，形成紅細(xì)胞無效性生成的溶血性貧血。
輕度地中海貧血很小需要輸血，而重型地中海貧血?jiǎng)t依靠輸血才能維持生命。
�、僦虚g型α地中海貧血(血紅蛋白H病)患者在有感染或妊娠時(shí)貧血顯著加重，此時(shí)若有代償不全的貧血癥狀時(shí)，則可適當(dāng)輸注濃縮紅細(xì)胞。
�、谥匦挺碌刂泻Ｘ氀颊咭坏┐_診，應(yīng)盡早輸血治療。
其理由是這類患者出生6個(gè)月后開始出現(xiàn)貧血，此后貧血呈進(jìn)行性加重。
患者有發(fā)育障礙，逐漸出現(xiàn)心臟擴(kuò)大，肝脾腫大，骨病變等。
骨髓無效性造血促使胃腸道對(duì)鐵吸收過多，發(fā)生繼發(fā)性血色病。
如能盡早輸血，特別是采用“高量”輸血，可延緩上述病理改變的發(fā)生。
�、壑虚g型β地中海貧血患者如有感染、妊娠及手術(shù)等應(yīng)激情意亦需臨時(shí)輸注紅細(xì)胞。
1.4 輸血血液成分選擇。
�、俚刂泻Ｘ氀颊卟淮嬖谘萘坎蛔愕膯栴}，有輸血指征者只能輸紅細(xì)胞，無須輸全血。
�、谶x擇何種紅細(xì)細(xì)胞胞制品應(yīng)根據(jù)病情決定，最好選用去除白細(xì)胞的紅細(xì)胞(如：過濾法制備的紅細(xì)胞或新型血細(xì)胞分離機(jī)單采法獲得的紅細(xì)胞)。
�、圻^去曾提倡輸注年輕紅細(xì)胞以減少輸血次數(shù)及延長輸血間歇期，由于只能降低輸血需求量的12～16%，且年輕紅細(xì)胞制備相當(dāng)繁瑣，費(fèi)用高，現(xiàn)已較少采用。
1.5 輸血前檢驗(yàn)。
�、偌�(xì)心查對(duì)及重視配血液標(biāo)本：地中海貧血是血液病之一，正確取得配血樣本是安全輸血的關(guān)鍵措施，配血樣本必須經(jīng)鑒定和標(biāo)記，確定來自地中海貧血患者和供血者，要與血液審請單上的內(nèi)容核對(duì)，必須有正確的標(biāo)簽，表明患者當(dāng)前的免疫學(xué)狀況。
安全輸血從源頭抓起就應(yīng)重視如何獲得正確的配血標(biāo)本。
一旦地中海貧血患者的血液標(biāo)本張冠李戴，安全輸血的所有防范措施都將化為泡影。
減少這種錯(cuò)誤的有效方法是每個(gè)住院患者的手腕上系上一個(gè)寫明患者姓名和住院號(hào)的標(biāo)簽。
凡資料不全的申請單，尤其是缺乏輸血史、妊娠史和醫(yī)師簽名的申請單要退回臨床科室補(bǔ)上，不得遷就。
�、谡J(rèn)真做好正反定型和Rh(D)定型：紅細(xì)胞血型系統(tǒng)最具有臨床意義的是ABO和Rh兩大系統(tǒng)，因此目前要求對(duì)所有的患者進(jìn)行ABO血型和Rh血型常規(guī)檢測。
其體內(nèi)含有抗A和抗B，孟買型個(gè)體由于紅細(xì)胞上缺乏A、B和H抗原，所以其體內(nèi)含有抗-A、-B和-H。
因此在ABO血型檢測中，要求同時(shí)做正反定型，即采用已知型特異性的抗體試劑檢查紅細(xì)胞的抗原，以及用已知血型的試劑紅細(xì)胞檢查血清中的抗體，綜合兩者結(jié)果判斷血型。
只有反定型結(jié)果相符才能正確判定ABO血型。
正反定型不符要查明原因。
因此，單純正定型或反定型并不能正確地鑒定所有ABO血型。
反定型對(duì)ABO亞型的發(fā)現(xiàn)特別有幫助。
原因是亞型患者紅細(xì)胞上A或B抗原很弱，可致血型誤定。
通過正反定型易于發(fā)現(xiàn)二者結(jié)果不一致，從而引起警惕。
�、圩龊每贵w篩選和鑒定：方法是用受檢者血清與試劑紅細(xì)胞起反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)在37C臨床意義的抗體。
常規(guī)對(duì)地中海貧血患者的血清或血漿作抗體篩選試驗(yàn)，以發(fā)現(xiàn)有臨床意義的意外抗體，必要時(shí)可作供血者血清的抗體篩選工作，以減少供血者的意外抗體進(jìn)入地中海貧血患者的可能性。
一旦檢出抗體，應(yīng)作抗體鑒定試驗(yàn)。
對(duì)地中海貧血患者血清作抗體篩選試驗(yàn)的目的是檢出有臨床意義的抗體，避免盲目配血，提高安全輸血水平。
④高度重視交叉配血：包括三類，一是“主側(cè)”試驗(yàn)，二是“次側(cè)”試驗(yàn)，三是“自身對(duì)照”試驗(yàn)，交叉配血試驗(yàn)的目的是檢測受、供者血液之間是否有不相配合的抗原、抗體成分。
由于抗體包括鹽水反應(yīng)性抗體及非鹽水反應(yīng)性抗體，因此交叉配血試驗(yàn)中要求采用能夠檢測出這兩種類型抗體的方法。
血庫交叉配血用鹽水法和改良低離子凝聚胺法，目的是為了防止輸血后產(chǎn)生溶血性反應(yīng)，是臨床輸血工作的最后一道實(shí)驗(yàn)性檢查，也是最關(guān)鍵的輸血前檢查實(shí)驗(yàn)。
2 結(jié) 果
從1994~2006年我院血庫，認(rèn)真扎實(shí)做好輸血前檢驗(yàn)，未出現(xiàn)因輸血發(fā)生的醫(yī)療事故。
3 討 論
采集血液標(biāo)本后必須在離開患者床邊之前在盛血試管上標(biāo)明患者姓名、住院號(hào)及標(biāo)本采集日期。
貼有標(biāo)簽的血標(biāo)本連同申請單經(jīng)核對(duì)后由醫(yī)護(hù)人員送血庫，雙方確認(rèn)并簽名，不得由非醫(yī)務(wù)人員送標(biāo)本。
血庫人員在檢驗(yàn)之前必須確認(rèn)盛血試管上的標(biāo)簽與申請單上的資料一致。
采集配血標(biāo)本的人員須認(rèn)真鑒別地中海貧血患者身份，并與輸血申請單及患者腕環(huán)上的資料比較核對(duì)，二者有矛盾時(shí)不得采集血液標(biāo)本，地中海貧血患者的姓名、床號(hào)及床頭卡等資料不足為據(jù)。
如對(duì)地中海貧血患者的身份有疑問必須重新采集血標(biāo)本，不得經(jīng)電話詢問后就擅自修改錯(cuò)誤的標(biāo)簽或申請單。
在血型鑒定過程中有若干因素可導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果，人為因素有：①標(biāo)本或試劑搞錯(cuò);②器材不潔;③試劑污染或失效;④離心過度或不足;⑤陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識(shí)別;⑥漏加試劑;⑦結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤;⑧細(xì)胞與血清比例不適當(dāng)。
客觀因素有：①血清異常引起串線狀形成;②紅細(xì)胞致敏，在含高蛋白介質(zhì)的試劑中發(fā)生凝集;③異�；蛐� ABO亞型的弱抗原難以檢出;④近期輸血顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象;⑤嵌合體血型體內(nèi)有兩群紅細(xì)胞;⑥疾病因素導(dǎo)致抗原減弱;⑦紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象;⑧異常的血漿蛋白造成假凝現(xiàn)象;⑨不規(guī)則抗體的存在與試劑A、B細(xì)胞上的相應(yīng)抗原起反應(yīng);低丙種球蛋白血癥、年齡因素 有未產(chǎn)生自己抗體的嬰兒、抗體水平下降的老人，試驗(yàn)時(shí)可出現(xiàn)異常結(jié)果。
如抗體篩選試驗(yàn)為陽性，應(yīng)作抗體特異性鑒定，凡遇有下列情況必須作抗體篩選試驗(yàn);交叉配血不合時(shí);對(duì)有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要接受多次輸血者。
如抗體篩選試驗(yàn)陽性，缺乏譜細(xì)胞鑒定其特異性時(shí)，送東莞市血站鑒定。
交叉配血試驗(yàn)常用的方法有鹽水法、酶法、抗球蛋白法、凝聚胺(Polybrne)法，凝聚胺法對(duì)Kell系統(tǒng)之外的大多數(shù)血型系統(tǒng)敏感度高且操作簡便、快速。
參考文獻(xiàn)
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地中海貧血基因檢測的重要性【2】
【摘 要】目的：探討地中海貧血基因檢測在地中海貧血篩查診斷中的應(yīng)用價(jià)值。
方法：對(duì)地貧調(diào)查中的1354例小學(xué)生進(jìn)行血液常規(guī)檢測、血紅蛋白電泳和地中海貧血基因檢測，統(tǒng)計(jì)分析三種篩查診斷方法的關(guān)系。
結(jié)果：以MCV≤80fl為標(biāo)準(zhǔn)篩查地貧，α地貧的漏診率為35.87%，β地貧漏診率為6.74%;以MCH≤25pg為篩查標(biāo)準(zhǔn)，α地貧漏診率為38.48%，β地貧漏診率為15.28%;以MCV≤80fl、MCH≤25pg聯(lián)合為篩查標(biāo)準(zhǔn)，α地貧漏診率為29.26%，β地貧漏診率為5.96%;以血紅蛋白電泳HbA2>3.5%為篩查標(biāo)準(zhǔn)，β地貧漏診率為0.26%，發(fā)出現(xiàn)快速區(qū)帶篩查α地貧漏診率為98.00%。
結(jié)論：MCV、MCH和血紅蛋白電泳可作為地貧篩查的一種簡單、方便、快速的方法，但不能作為金標(biāo)準(zhǔn)，地中海貧血基因檢測在優(yōu)生優(yōu)育指導(dǎo)中起著不可替代的重要作用。
【關(guān)鍵詞】人性化護(hù)理;ICU;應(yīng)用
[Abstracr] Objective： Discuss the Mediterranean anemia gene detection in the diagnosis of the Mediterranean anemia screening application value. Method： Of the Mediterranean anemia’s survey 1354 cases of primary school students to proceed blood routine detection、hemoglobin electrophoresis and Mediterranean anemia gene test， statistical analysis of three kinds of screening diagnosis method of the relationship. Result：
According to the MCV 80 fl or less Mediterranean anemia for standard screening， αMediterranean anemia missed diagnosis rate was 35.87%， βMediterranean anemia missed diagnosis rate was 6.74%; In MCH 25 pg or less for screening criteria， αMediterranean anemia missed diagnosis rate was 38.48%， β Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 15.28%。
With the MCV80 fl， MCH 25 pg or less joint criteria for screening， α Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 29.26%， β Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 5.96%; By hemoglobin electrophoresis HbA2 > 3.5% for screening criteria，β Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 0.26%， send a quick zone screening α Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 98.00%.
Conclusion： The MCV， MCH and hemoglobin electrophoresis can be used as the Mediterranean anemia screening method of a kind of simple、convenient、fast， but not as a gold standard， the Mediterranean anemia gene testing detects in guidance of eugenic and superior nurture plays an irreplaceable important role.
[Key words] MCV; MCH; Hemoglobin Electrophoresis; Mediterranean anemia gene
地中海貧血，又稱海洋性貧血，亦稱珠蛋白生成障礙性貧血。
它是一組常染色體遺傳性疾病，其發(fā)病機(jī)理是珠蛋白基因缺陷而導(dǎo)致一種或幾種珠蛋白合成障礙，造成血紅蛋白中的α類和β類珠蛋白比例失衡，以致引起慢性溶血性貧血。
臨床癥狀輕重不一，輕型地中海貧血一航無明顯癥狀。
對(duì)地貧的篩查診斷方法有多種，常用的有血液分析、血紅蛋白電泳、紅細(xì)胞脆性檢測等，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，地貧的基因診斷已被應(yīng)用于臨床。
現(xiàn)對(duì)1354例在讀小學(xué)生進(jìn)行血液分析、血紅蛋白電泳和地貧基因檢測，分析地貧基因檢測的重要性，報(bào)道如下：
1 資料與方法
1.1 受檢對(duì)象：隨機(jī)選取德宏州鄉(xiāng)鎮(zhèn)小學(xué)在讀學(xué)生1354人。
1.2 儀器與試劑
1.2.1 儀器：杭州博日熒光定量PCR儀、日本東亞SysmexXT-1800i全自動(dòng)血液學(xué)分析儀、美國CVP凝膠成像儀、韓國COMBI分子雜交箱、北京六一廠31B瓊脂糖水平電泳儀
1.2.2 試劑：亞能生物技術(shù)(深圳)有限公司提供α-地貧和β-地貧基因檢測試劑盒
1.3 方法
1.3.1 選取研究對(duì)象的血液常規(guī)參數(shù)MCV和MCH值：空腹靜脈血2ml，注入EDTA-K2抗凝管混勻，于2h內(nèi)用SysmexXT-1800i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)，按照儀器操作規(guī)程嚴(yán)格進(jìn)行操作，本實(shí)驗(yàn)室正常參考值：MCV 82.6～99.1fl MCH 26.2～33.3Pg。
地中海貧血實(shí)驗(yàn)診斷進(jìn)展【3】
摘要：在人類遺傳疾病中，地中海貧血較為常見，它是一種隱性遺傳病。
地中海貧血作為一種溶血性貧血癥，具有較大的地域性差異，我國南方為地中海貧血的多發(fā)地區(qū)，其具有胎兒死亡率高、發(fā)病率高的特點(diǎn)，臨床上目前還沒研究出徹底治愈地中海貧血的方法。
所以選擇合理的實(shí)驗(yàn)方法診斷地中海貧血，是預(yù)防重型地中海貧血的一項(xiàng)有效措施，在產(chǎn)前診斷中，可診斷出重型地貧胎兒，預(yù)防患兒出生。
本文主要對(duì)地中海貧血的各種實(shí)驗(yàn)診斷方法進(jìn)行了綜述。
關(guān)鍵詞：地中海貧血 α珠蛋白基因 β珠蛋白基因 重型地中海貧血
地中海貧血(簡稱地貧)是一組先天性溶血性疾病，也是最為常見的一種單基因遺傳疾病。
地中海貧血是由于珠蛋白基因發(fā)生突變或缺失，使一種或多種珠蛋白肽鏈發(fā)生合成障礙，改變血紅蛋白結(jié)構(gòu)，縮短紅細(xì)胞壽命，從而發(fā)生慢性溶血[1]。
按照受累珠蛋白肽鏈的不同，將地中海貧血分為α、β、γ、δ、δβ等類型，其中最為常見的是α地貧和β地貧，其產(chǎn)生的危害也是最大的。
α地中海貧血，是指α珠蛋白基因發(fā)生突變或缺失，所造成的α珠蛋白肽鏈合成障礙[2]。
β地中海貧血，是指β珠蛋白基因發(fā)生突變，所造成的β珠蛋白肽鏈合成不足或缺失[3]。
1 地貧的分子基礎(chǔ)
在人體中，由α2β2四聚體所構(gòu)成的血紅蛋白(HbA)決定著紅細(xì)胞呼吸，血液中有98.5%的O2都由HbA進(jìn)行運(yùn)輸[3]。
若匹配的兩條α肽鏈、兩條β肽鏈中有任何一條發(fā)生了合成障礙，就會(huì)引起地中海貧血，使紅細(xì)胞膜骨架發(fā)生異常，珠蛋白鏈發(fā)生沉淀，發(fā)生無效性骨髓紅細(xì)胞生成現(xiàn)象，導(dǎo)致紅細(xì)胞脆性降低、異形性增加、僵硬、變小，發(fā)生以脾溶血、骨髓溶血為主的溶血性貧血[4]。
α珠蛋白基因發(fā)生突變或缺失，β珠蛋白水平升高，會(huì)降低α2δ2水平和Hb-A2水平，游離的γ肽鏈、β肽鏈通過自身的聚合作用，形成Hb Bart(γ4聚體)、HbH(β4聚體)。
β4聚體不穩(wěn)定，且容易發(fā)生自身氧化作用，使紅細(xì)胞膜脂質(zhì)發(fā)生過氧化損傷，對(duì)紅細(xì)胞內(nèi)霉的活性產(chǎn)生抑制作用[5]。
γ4聚體具有較高的氧親和力，對(duì)于低氧分壓組織，無法釋放氧，從而易使組織發(fā)生缺氧現(xiàn)象。
2 地貧的篩查方法
在醫(yī)學(xué)水平、醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展下，地貧的臨床治療已獲得了很大的進(jìn)步，然而重癥地貧仍然較難治愈。
在地貧試驗(yàn)診斷中，篩查法是較為常用的一種方法，應(yīng)用篩查法對(duì)孕婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷，能有效預(yù)防重癥地貧的發(fā)生。
地貧篩查法具有經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)小、操作簡便的優(yōu)點(diǎn)，常見篩查手段包括血紅蛋白分析和血液常規(guī)檢查兩類，具體檢查項(xiàng)目包括血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白分析、紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)及滲透脆性檢測。
2.1 血細(xì)胞計(jì)數(shù)。
地貧篩查法中，會(huì)應(yīng)用血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定血液中的WBC(白細(xì)胞數(shù))、血小板參數(shù)和RBC(紅細(xì)胞數(shù))。
地貧的一個(gè)主要癥狀就是紅細(xì)胞色素含量降低、體積變小，故MCV(紅細(xì)胞平均體積)和MCH(紅細(xì)胞血紅蛋白含量)在地貧篩查中發(fā)揮著重要作用。
當(dāng)MCH<27pg、MCV<79fl時(shí)，臨床可診斷為可疑地貧，此時(shí)血液中的血細(xì)胞壓積、血紅素、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)均會(huì)發(fā)生一定的變化[6]。
2.2 血紅蛋白分析。
定量、定性分析血紅蛋白，是臨床確診地貧的可靠方法。
血紅蛋白分析可采用毛細(xì)管電泳、Hb電泳、血紅蛋白瓊脂糖電泳等方法。
其中，毛細(xì)管電泳是以毛細(xì)管作為Hb的分離通道，Hb在電場的作用力下，會(huì)發(fā)生定向移動(dòng)，根據(jù)其速度差別來實(shí)現(xiàn)分離，該方法具有試劑量少、消耗樣品少、分辨率高、靈敏度好、重現(xiàn)性高、簡便快捷等優(yōu)點(diǎn)，在臨床上已得到了廣泛的應(yīng)用[7];Hb電泳法的作用機(jī)理為：Hb等電點(diǎn)均<7，其在緩沖鹽溶液中(pH=8.5)帶負(fù)電荷，此時(shí)如果有電場作用，就會(huì)使Hb移向陽極。
由于Hb的等電點(diǎn)存在差異，分子量大小也不同，故其移動(dòng)速度也會(huì)不同。
因此采用Hb電泳法，可實(shí)現(xiàn)Hb的定性分析。
若將醋酸纖維薄膜做支持物，還可實(shí)現(xiàn)Hb的定量分析;血紅蛋白瓊脂糖電泳法以堿變性檢測作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，在堿性條件下，Hb分子受電場作用發(fā)生分離，進(jìn)行染色操作后，就能定量分析血紅蛋白瓊脂糖。
地貧患者的血紅蛋白瓊脂糖檢測值會(huì)高于正常人[7]。
2.3 紅細(xì)胞滲透脆性檢測。
紅細(xì)胞滲透脆性檢測的目的是檢驗(yàn)紅細(xì)胞在不同滲透壓下的抵抗力。
通過紅細(xì)胞滲透脆性檢測試驗(yàn)，可找到紅細(xì)胞溶血的界限值，這一界限值是由紅細(xì)胞的體積與表面積之比來決定的。
由于地貧患者的紅細(xì)胞膜發(fā)生了代謝、生化和形態(tài)異常，所以其紅細(xì)胞脆性會(huì)比正常人低，其在0.36%的氯化鈉溶液中溶解度會(huì)降低[8]。
同時(shí)，缺鐵性貧血檢測指標(biāo)也呈陽性。
最近幾年，紅細(xì)胞脆性檢測和MCV在國內(nèi)外地貧篩查檢測中得到廣泛的應(yīng)用。
2.4 紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查。
在涂片上進(jìn)行瑞氏染色，觀察紅細(xì)胞形態(tài)、體積的變化情況。
在地貧診斷中，紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化也是一個(gè)重要的判定依據(jù)，根據(jù)患者貧血程度的不同，紅細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)各種異常形態(tài)、大小不均、靶形紅細(xì)胞、點(diǎn)彩紅細(xì)胞等。
病情越嚴(yán)重，紅細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化越明顯。
3 地貧的基因診斷法
地貧的發(fā)生與珠蛋白合成被阻斷有著密切聯(lián)系，大多數(shù)的地貧患者都是因?yàn)槿笔е榈鞍缀铣伤鸬摹?/p>
地貧的發(fā)生不但與DNA構(gòu)造有關(guān)，還與基因翻譯、轉(zhuǎn)錄過程緊密相關(guān)，故采用基因檢測能更準(zhǔn)確地診斷、預(yù)防地貧。
基因診斷(分子診斷)，是通過分析人體某一特定DNA或mRNA(轉(zhuǎn)錄物)，來診斷遺傳病的一種技術(shù)。
在我國，最早的地貧基因診斷技術(shù)是DNA點(diǎn)雜交，后來相繼經(jīng)歷了限制性內(nèi)切酶酶譜分析、RFLP(限制性內(nèi)切片段長度多態(tài)性)連鎖分析、ASO(寡核苷酸)探針雜交、PCR(聚合鏈酶反應(yīng))以及芯片技術(shù)幾個(gè)發(fā)展階段[8]。
尤其是PCR及其相關(guān)技術(shù)已成為了地貧臨床診斷中的普遍方法。
3.1 DNA點(diǎn)雜交。
該方法是最早應(yīng)用于地貧基因診斷的方法，它將基因作為靶分子，進(jìn)行基因與基因間的雜交。
基因雜交后采用電泳法對(duì)待測基因進(jìn)行分離，并將分離后的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)，使之與支持物結(jié)合，再利用標(biāo)記探針進(jìn)行檢測。
該方法診斷效率低下。
在上世紀(jì)90年代初，有學(xué)者在地貧診斷中初次運(yùn)用了反向雜交技術(shù)，該技術(shù)的運(yùn)用使地貧診斷效率大為提高。
通過改良，反向點(diǎn)雜交技術(shù)可以利用不同類型地貧的已知突變基因?qū)�，在末端轉(zhuǎn)移酶的作用下，使其擴(kuò)增為多聚尾巴，并固定在膜上，實(shí)現(xiàn)靶序列的擴(kuò)增、雜交。
與一次雜交方法相比，反向雜交能在待測樣本中獲取多種突變序列，使檢測時(shí)間大大縮短，診斷效率大為提升。
在反向雜交技術(shù)下進(jìn)行二次雜交，還可判斷出地貧類型，辨別不同突變類型的等位基因?qū)�、雜合子、純合子等，該技術(shù)是我國近年來在地貧實(shí)驗(yàn)診斷中應(yīng)用較多的方法[9]。
3.2 RFLP連鎖分析。
RFLP連鎖分析的原理：基因的限制性內(nèi)切酶具有識(shí)別、切割核苷酸序列的功能，通過切割核苷酸序列，可獲得片段。
堿基突變使限制性內(nèi)切酶的切位點(diǎn)發(fā)生丟失或增多，改變片段大小。
在限制性內(nèi)切酶的水解作用下，突變基因電泳條帶的大小、數(shù)量均會(huì)改變，分析這些改變情況就能判定基因是否發(fā)生了突變。
該方法的缺點(diǎn)在于操作繁瑣，且無法檢測出突變基因類型。
3.3 ASO探針雜交技術(shù)。
ASO探針雜交的技術(shù)原理為：利用引物使珠蛋白基因擴(kuò)增，并合成與突變序列、正常序列互補(bǔ)的ASO探針。
在尼龍膜上點(diǎn)上聚合鏈酶反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物，將其與突變ASO探針、正常序列分別進(jìn)行雜交，一定條件下將未完全互補(bǔ)的探針完全洗脫，然后通過放射自顯影技術(shù)查看雜交結(jié)果。
該技術(shù)具有靈敏、快速的優(yōu)點(diǎn)，但其對(duì)DNA數(shù)量、純度的要求均較高，目前在β地貧基因診斷中的應(yīng)用較多。
3.4 PCR技術(shù)。
聚合鏈酶反應(yīng)，是在體外環(huán)境中，應(yīng)用DNA聚合酶催化成對(duì)引物的DNA特異性片段，進(jìn)行基因合成，以實(shí)現(xiàn)體外擴(kuò)增的一種技術(shù)。
目前在α地貧的基因診斷中較多地應(yīng)用到了PCR技術(shù)，尤其是多重PCR技術(shù)(mPCR)的應(yīng)用，mPCR技術(shù)的特點(diǎn)在于一個(gè)聚合鏈酶反應(yīng)體系中有四對(duì)特異引物，其根據(jù)各突變位點(diǎn)的擴(kuò)增情況來加以判斷。
mPCR技術(shù)可檢測出α-SEA(東南亞型珠蛋白基因缺失)、―α3.7(右缺失)、―α4.2(左缺失)。
mPCR技術(shù)不僅能辨別α地貧的類別，還能進(jìn)行基因分型。
在產(chǎn)前診斷、分子篩查中采用單管mPCR技術(shù)，能快速、準(zhǔn)確地檢測出―α4.2、―α3.7、―SEA型α地貧。
3.5 PCR、斑點(diǎn)雜交結(jié)合技術(shù)。
PCR、斑點(diǎn)雜交結(jié)合技術(shù)在β地貧的分型、診斷中得到了初次運(yùn)用，應(yīng)用結(jié)果表明，該技術(shù)的準(zhǔn)確性、可靠性均較高，并且樣品耗用量少，經(jīng)濟(jì)性高。
在應(yīng)用該方法進(jìn)行地貧基因診斷時(shí)，要對(duì)待查基因逐個(gè)進(jìn)行篩查以明確發(fā)生了何種突變，故該方法需要較長時(shí)間，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)具備3個(gè)條件：一是要有已知突變基因，將其作為模板，利用PCR技術(shù)擴(kuò)展突變序列、正常序列片段，把放在中心位置的突變基因標(biāo)記為探針;二是需要挑選出合適的引物;三是要控制好雜交條件，確保待測堿基與探針之間沒有配錯(cuò)情況發(fā)生，以免出現(xiàn)雜交失敗。
4 總結(jié)
綜上所述，地中海貧血的異質(zhì)性、地域差異性較大，這就增加了臨床診斷及處理的難度。
為實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育的目標(biāo)，產(chǎn)前通過基因診斷、系統(tǒng)篩查，實(shí)施對(duì)無癥狀攜帶人群的監(jiān)控，是預(yù)防重型地中海貧血的一項(xiàng)有效措施。
若夫妻雙方是同型的地貧患者，妊娠時(shí)就會(huì)有25%的幾率發(fā)生重型地貧兒，所以應(yīng)當(dāng)對(duì)常見地貧基因型進(jìn)行準(zhǔn)確、及時(shí)的產(chǎn)前診斷，綜合應(yīng)用基因診斷法和篩查法，以提高診斷準(zhǔn)確性，盡早發(fā)現(xiàn)重型地貧患兒，及時(shí)采取相應(yīng)措施。
目前，臨床對(duì)于地中海貧血的診斷，多采用多重PCR技術(shù)和PCR結(jié)合反向點(diǎn)雜交技術(shù)，其能對(duì)常見的α和β地中海貧血進(jìn)行準(zhǔn)確、快速的診斷。
在產(chǎn)前診斷中，可診斷出重型地貧胎兒，預(yù)防患兒出生。
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